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一、實驗前將所有試劑平衡至室溫，包括樣本、TMB(非常重要)。

二、強烈建議老師在操作ELISA試劑盒的時候每個樣本包括標(biāo)準(zhǔn)品做復(fù)孔(請務(wù)必這樣操作)，因為這樣可以,求平均值，確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性對試劑盒的性能進(jìn)行評估對自己的操作進(jìn)行評估解決跳孔。

三、為保證老師ELISA試劑盒實驗結(jié)果準(zhǔn)確 ，其中幾點重要的操作注意事項請務(wù)必參考：

如果以下表述與說明書中不一致，請按照實驗對應(yīng)說明書的要求操作 。

1、標(biāo)準(zhǔn)品溶解：標(biāo)準(zhǔn)品溶解嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，建議老師進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時，在EP管中進(jìn)行。

2、孵育：說明書中進(jìn)行孵育的時候，一定要用微孔板振蕩器振蕩，這個很重要，利于抗原抗體充分結(jié)合。

3、洗板：建議按照說明書操作，每次洗滌至少洗液浸泡30s，重復(fù)6次，洗板時間太短、次數(shù)太少會導(dǎo)致實驗效果 不佳，延長洗板時間和增加洗板次數(shù)可以使背景更干凈。

四、如何控制標(biāo)曲顯色(僅針對雙抗夾心法ELISA試劑盒)5 - 30分鐘顯色時間為經(jīng)驗范圍，每個具體的實驗，可根據(jù)以下情況，確定大致的顯色時間：

1) 肉眼觀察：標(biāo)曲S5孔有淡藍(lán)色、Blank孔無明顯藍(lán)色時，即可終止。

2) 儀器判斷：630 nm左右波長下，標(biāo)曲S1孔的OD值達(dá)到0.5 - 0.7、S5孔的OD值達(dá)到0.05 - 0.08、Blank孔的OD 值小于0.05時，即可終止。

3) 高敏系列試劑盒因靈敏度更高，需嚴(yán)格控制顯色時長，可較普通試劑盒適當(dāng)縮短顯色時間。